Uma equipe de pesquisa dos EUA desenvolveu um teste inovador baseado em CRISPR para o ponto de atendimento, capaz de diagnosticar tuberculose (TB) rapidamente a partir de amostras de escarro e sem a necessidade de equipamentos caros. O estudo, publicado na Science Advances, descreve o teste chamado SHINE-TB, que foi projetado especificamente para uso em regiões com poucos recursos, onde métodos de diagnóstico simples e acessíveis são urgentemente necessários.
O SHINE-TB combina o processamento eficiente de amostras com um ensaio otimizado de CRISPR-Cas13a/Cas12a para detectar dois elementos conservados do patógeno da tuberculose Mycobacterium tuberculosis (Mtb), IS6110 e IS1081. O teste é o primeiro a unir a amplificação por recombinase-polimerase (RPA) e a detecção em uma única etapa de reação, além de ser compatível com técnicas de fluxo lateral e liofilização. Isso permite fácil manuseio e armazenamento, sem a necessidade de cadeias de frio complexas.
Métodos de diagnóstico convencionais, como testes de cultura, microscopia de escarro ou reação em cadeia da polimerase (PCR), são frequentemente limitados por compromissos em sensibilidade, velocidade ou pela necessidade de equipamentos especiais. O novo teste utiliza a alta especificidade e a atividade de clivagem colateral de proteínas CRISPR, como Cas12 e Cas13, em combinação com a amplificação isotérmica, para garantir um diagnóstico acessível e preciso. O SHINE-TB consiste em duas reações paralelas que integram RPA, transcrição in vitro e detecção, incluindo um ensaio Cas13a para Mtb e um ensaio Cas12a para DNA humano como controle interno.
O teste requer apenas 100 microlitros de escarro por extração e aproximadamente 2 microlitros por reação. Em testes com amostras de escarro artificialmente contaminadas, o SHINE-TB demonstrou um limite de detecção de 69,0 CFU/ml para Mtb H37Rv e 80,5 CFU/ml para Mycobacterium bovis BCG, sem reatividade cruzada com outras bactérias ou fungos. Em uma pequena amostra de 13 amostras de escarro com esfregaço positivo, o teste atingiu 100% de especificidade e sensibilidade em comparação com testes de cultura. Assim, o SHINE-TB atende às metas da Organização Mundial da Saúde (OMS) para testes de ponto de atendimento (pelo menos 85% de sensibilidade) e testes de baixa complexidade (pelo menos 90% de sensibilidade).
Os pesquisadores enfatizam que o SHINE-TB oferece um desempenho comparável aos métodos estabelecidos de padrão ouro, mas com custos mais baixos e sem a necessidade de equipamentos especializados. Isso torna o teste particularmente adequado para uso em regiões com alta carga de TB e recursos limitados.
