طور فريق بحثي من الولايات المتحدة اختبارًا مبتكرًا قائمًا على كريسبر في نقطة الرعاية، يمكنه تشخيص السل (TB) بسرعة من عينات اللعاب دون الحاجة إلى معدات باهظة الثمن. تصف الدراسة، المنشورة في Science Advances، الاختبار المسمى SHINE-TB، والذي تم تصميمه خصيصًا للاستخدام في المناطق ذات الموارد المحدودة، حيث هناك حاجة ماسة لطرق تشخيص بسيطة وميسورة التكلفة.
يجمع SHINE-TB بين معالجة فعالة للعينة واختبار محسّن لكريسبر-Cas13a/Cas12a للكشف عن عنصرين محفوظين من مسبب مرض السل Mycobacterium tuberculosis (Mtb)، وهما IS6110 و IS1081. هذا الاختبار هو الأول الذي يجمع بين تضخيم بوليميراز الريكومبيناز (RPA) والكشف في خطوة تفاعل واحدة، وهو أيضًا متوافق مع تقنيات التدفق الجانبي والتجفيف بالتجميد. هذا يتيح سهولة التعامل والتخزين دون الحاجة إلى سلاسل تبريد معقدة.
غالبًا ما تكون طرق التشخيص التقليدية مثل اختبارات المزرعة، أو ميكروسكوب البلغم، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مقيدة بسبب المفاضلات في الحساسية أو السرعة أو الحاجة إلى معدات خاصة. يستخدم الاختبار الجديد الانتقائية العالية ونشاط القطع الجانبي لبروتينات كريسبر مثل Cas12 و Cas13 بالاقتران مع التضخيم المتساوي الحراري لضمان تشخيص دقيق ومتاح. يتكون SHINE-TB من تفاعلين متوازيين يدمجان RPA والنسخ في المختبر والكشف، بما في ذلك اختبار Cas13a لـ Mtb واختبار Cas12a لـ الحمض النووي البشري كتحكم داخلي.
يتطلب الاختبار 100 ميكرولتر فقط من البلغم لكل استخلاص وحوالي 2 ميكرولتر لكل تفاعل. في الاختبارات التي أجريت على عينات بلغم ملوثة بشكل مصطنع، أظهر SHINE-TB حد اكتشاف يبلغ 69.0 وحدة مستعمرة/مل لـ Mtb H37Rv و 80.5 وحدة مستعمرة/مل لـ Mycobacterium bovis BCG، دون تفاعل متصالب مع بكتيريا أو فطريات أخرى. في عينة صغيرة من 13 عينة بلغم مع مسحة إيجابية، حقق الاختبار خصوصية وحساسية بنسبة 100 بالمائة مقارنة باختبارات المزرعة. وبهذا، يلبي SHINE-TB الأهداف المحددة من قبل منظمة الصحة العالمية (WHO) لاختبارات نقطة الرعاية (حساسية لا تقل عن 85٪) والاختبارات منخفضة التعقيد (حساسية لا تقل عن 90٪).
يؤكد الباحثون أن SHINE-TB يوفر أداءً يضاهي الطرق القياسية الذهبية الراسخة، ولكن بتكلفة أقل ودون الحاجة إلى معدات متخصصة. هذا يجعل الاختبار مناسبًا بشكل خاص للاستخدام في المناطق ذات العبء العالي للسل والموارد المحدودة.
