O estudo, de Batbileg Bor do ADA Forsyth Institute, Cambridge, MA, EUA, adaptou a nova plataforma de diagnóstico baseada em CRISPR-Cas, Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking (SHERLOCK), para a detecção específica de espécies de patógenos bacterianos orais e ácidos nucleicos do papilomavírus humano (HPV). Os investigadores desenvolveram um pipeline computacional capaz de gerar RNAs guia e primers de genes específicos de espécies adequados para o SHERLOCK. Esses construtos foram sintetizados por sistemas de biossíntese sem células, e sua especificidade e sensibilidade foram validadas experimentalmente por leituras de fluorescência de RNAs repórteres.
O estudo alcançou a detecção de bactérias orais na faixa de molécula única que permaneceu específica na presença de DNA fora do alvo encontrado na saliva. Além disso, o ensaio foi refinado para detectar patógenos orais comuns (por exemplo, P. gingivalis, F. nucleatum) diretamente de amostras de saliva não processadas. Os resultados da detecção, quando testados em 30 amostras de saliva de pacientes, alinharam-se totalmente com os de outros métodos de detecção, como qPCR e sequenciamento de rRNA 16S. Como prova de princípio, os investigadores também detectaram especificamente cepas de HPV 6, 11, 16, 18, 33 e 35 a partir de um fundo de gDNA.
Este método de detecção de patógenos orais é altamente escalável e pode ser facilmente otimizado para implementação em ambientes de ponto de atendimento. A detecção leva aproximadamente 35 minutos ou menos, tem custo extremamente baixo e não requer habilidades ou técnicas especiais para ser executada. Como o SHERLOCK tem como alvo sequências de ácidos nucleicos especificamente, ensaios futuros podem ser desenvolvidos para detectar outros microrganismos (Fungos e Arqueas), bem como produtos gênicos humanos.
https://www.iadr.org/about/news-reports/press-releases/rapid-specific-detection-oral-pathogens-using-crispr-based
